銀柴胡中DNA提取前處理检测産品配置單(組織研磨仪) 【刊物發表】

  • 應用領域: 制藥/化妝品
  • 檢測樣品: 中藥
  • 檢測項目:前處理
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  • 發布時間:2020-03-25
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文中使用筛选合适的DNA条形码序列,以建立基于DNA条形码技术的銀柴胡及其混伪品鉴定方法。该研究团队共收集了60份銀柴胡及其混伪品,进行DNA提取:取经鉴定的銀柴胡及其混伪品基原植物样品30 mg, 干燥药材去除表皮取中间部分50 mg,加入GP1 缓冲液和钢珠2 枚, 经高通量組織研磨机(美国SPEX公司 Geno 2010)研磨4 或6 min 后, 采用DNA 提取试剂盒提取总DNA,详细操作参照试剂盒说明书。 结果显示, ITS序列的PCR扩增及测序成功率最高,为95.2%, matK最低,为75%; 4种序列的长度范围为211~797 bp, ITS的GC含量在各序列中最高,为54.35%; matK和ITS的鉴定成功率较高,分别为92%和90%; Barcoding gap图显示ITS有明显的间隔区, rbc L、mat K和psb A-trn H序列间隔区不明显或种间种内变异有部分重叠; NJ系统进化树显示, ITS可将銀柴胡聚为一支,同属混伪品二柱繁缕与銀柴胡明显分为不同支, rbc L和mat K不能把混伪品二柱繁缕分开。因此, ITS序龄\勺魑y柴胡及其混伪品鉴定的优选条形码序列,为銀柴胡的真伪鉴定提供科学依据。
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25日零時起,湖北省除武漢市以外地區解除離鄂通道管控,國內“抗疫”成果顯著。本以爲國內的疫情得到有效控制,我們就可以松一口氣了,但國外患者數不斷創新高。截至3月24日,全球已突破40萬例,海外新增較前日增長15.18%,國外疫情不斷升級,再次讓我們見識了“新冠”病毒的厲害。

數據來自丁香園


2020年東京奧運聖會被推遲,美股一周內4次熔斷,全球30多個國家封城甚至封國,世界各國正在經受前所未有的考驗。而中國國內新增“新冠”確診病例連續多日0增長,援鄂醫療隊撤離,疫情重災區武漢不斷傳出好消息,被按下暫停鍵的湖北也正在重啓。中國的“抗疫”成果得到了全球各界的認可,其中一個重要的亮點引起了社會各界的重視。 

“社會各界認爲,中醫藥發揮了重要作用,成爲這次疫情防控的一大亮點。”中央指導組成員、衛生健康委黨組成員、中醫藥局黨組書記余豔紅介紹,全國新冠肺炎確診病例中,有74187人使用了中醫藥,占91.5%,其中湖北省有61449人使用了中醫藥,占90.6%。

“集中隔离,普遍服中藥,是阻止疫情蔓延的基础。”中国工程院院士、天津中医药大学校长张伯礼介绍,数据显示,2月初“四类人员”当中诊断确诊比例是超过80%,中旬就降到了30%,到2月底下降到了百分之十以内。

可以說中醫藥在此次抗擊“新冠“的戰役中,起到了至關重要的作用,具體內容,請大家查看文章:論中醫藥在“新冠”防止中的作用及效果。

 

我们今天的主角“銀柴胡”是中医药中清肺的常用中藥材。銀柴胡的功效是清虚熱、除疳熱,銀柴胡的作用是治阴虚发熱、骨蒸劳熱、小儿疳积发熱,銀柴胡用药禁忌是外感风寒及血虚。(具体用药,请遵照医生遗嘱,使用专业医师开具的药方)


 銀柴胡 

《本草求原》:清肺、胃、脾、肾熱,兼能凉血。

《纲目拾遗》:谓熱在骨髓,非銀柴胡莫疗,用以治虚劳肌熱骨蒸,劳疟熱从髓出及小儿五疳赢熱,盖退熱而不苦泄,理阴而不升腾,固虚熱之良药。

 

銀柴胡作为在临床及中成药生产中应用广泛的中藥材, 部分混伪品流入市场, 直接影响着相关中藥的质量及临床用药安全。由于受鉴定人员经验、种质资源、药材采收时期等因素影响, 利用传统生药鉴定的方法已经难以满足銀柴胡真伪鉴定的需求。

中文核心期刊《药学学报》2019年05期中,一篇来自宁夏中藥材开发与利用工程技术研究中心李军禑崴:“中藥材銀柴胡及其混伪品的DNA条形码鉴定研究”的文中,选取4种候选条形码序列ITS、psbA-trnH、rbcL 和matK, 以PCR扩增和测序成功率、遗传距离、变异率、Barcoding gap 及进化树等为指标, 分析其对銀柴胡及其混伪品的鉴别情况。


文中使用筛选合适的DNA条形码序列,以建立基于DNA条形码技术的銀柴胡及其混伪品鉴定方法。该研究团队共收集了60份銀柴胡及其混伪品,进行DNA提取:取经鉴定的銀柴胡及其混伪品基原植物样品30 mg, 干燥药材去除表皮取中间部分50 mg,加入GP1 缓冲液和钢珠2 枚, 经高通量組織研磨机(美国SPEX公司 Geno 2010)研磨4 或6 min 后, 采用DNA 提取试剂盒提取总DNA,详细操作参照试剂盒说明书。

SPEX 高通量組織研磨仪,可一批次处理6块深孔板,共576个样品,可进行干磨、湿磨、低温研磨,可快速粉碎样品,并保障样品完整性,对研磨中藥材非常有效,是中藥材研究的利器。


 

而后对4种DNA条形码序列ITS、psb A-trn H、rbc L和mat K进行PCR扩增和测序,计算各序列PCR扩增和测序成功率;利用MEGA7.0分析序列特征、计算遗传距离,并构建Neighbour-joining (NJ)系统进化树;利用种间种内变异分析做Barcoding gap图;运用BLAST方法计算各序列鉴定成功率,通过以上指标綜合评价不同序列的鉴别能力。

 

结果显示, ITS序列的PCR扩增及测序成功率最高,为95.2%, matK最低,为75%; 4种序列的长度范围为211~797 bp, ITS的GC含量在各序列中最高,为54.35%; matK和ITS的鉴定成功率较高,分别为92%和90%; Barcoding gap图显示ITS有明显的间隔区, rbc L、mat K和psb A-trn H序列间隔区不明显或种间种内变异有部分重叠; NJ系统进化树显示, ITS可将銀柴胡聚为一支,同属混伪品二柱繁缕与銀柴胡明显分为不同支, rbc L和mat K不能把混伪品二柱繁缕分开。因此, ITS序龄\勺魑y柴胡及其混伪品鉴定的优选条形码序列,为銀柴胡的真伪鉴定提供科学依据。

 

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